Phos-tag™ 技術
Phos-tag™ とは、広島大学の医薬分子機能科学研究室が開発したリン酸モノエステルアニオン（R-OPO32-）を中性pH（生理的pH）において捕捉する機能分子です。
二つの金属イオンを持つ二核金属錯体がリン酸モノエステルを高選択的に捕捉します。
Ser/Thr/Tyr などいずれのタンパク質のリン酸化化体も捕捉します。
Phos-tag™ とモデルリン酸化合物のpH依存的な水溶液内化学種の組成
亜鉛 Phos-tag™ 錯体（Zn2+-Phos-tag™ ）とのアニオン性基質との1:1複合体の解離定数はフェニルリン酸イオンKd=25nM、酢酸イオンKd=0.4mMであり、Zn2+- Phos-tag™ はリン酸ジアニオンを高選択的に（カルボン酸アニオンの16,000 倍）捕捉します。
Zn2+-Phos-tag™ とフェニルリン酸（それぞれ10μmol/L）の混合物におけるpH依存的な水溶液化学種組成変化よりpH5-8（生理的pH）の条件下でZn2+- Phos-tag™ とフェニルリン酸イオンの1:1複合体が安定に形成されます。
広島大学 医薬分子機能科学研究室と株式会社ナード研究所は Phos-tag™ の機能を用いたリン酸化プロテオミクスに有用な新しい技術を開発し研究者の皆さまに、使いやすく、確かな情報を得るためのツールをご提供いたします。
Phos-tag™ Acrylamide
電気泳動によるリン酸化状態解析
Phos-tag™ 分子にアクリルアミドを結合させた製品です。電気泳動用のゲルに共重合させ、2価の金属錯体（Mn2+ or Zn2+）とすることで Phos-tag™ 電気泳動用のゲルを作成します。 Phos-tag™ 電気泳動では目的タンパク質のリン酸化状態に応じて分離することができます。泳動後は各種染色の他、ウエスタンブロッティングや質量分析にも使用可能です。
リン酸化タンパク質は、ゲルに固定された Phos-tag™ と可逆的な結合を繰り返しながら泳動されるため、相当する非リン酸化タンパク質よりも移動が遅れ、泳動像としては非リン酸化タンパク質よりもシフトアップします。
一つのタンパク質分子内に複数のリン酸化部位が存在して、様ざまなリン酸化状態が混在するタンパク質についてその状態の違いを移動度の異なるバンドとして分離できる。さらには、同一タンパク質においてリン酸化アミノ酸残基数が同じであってもその部位が異なる場合には、移動度の異なるバンドとして検出される特徴がありますので、リン酸化状態の違いを高精度かつ高感度に分析することができます。
| Phos-tag™ Acrylamide | Pkg. Size | Amount of ligand (Form) | 希望小売価格（税込） |
|---|---|---|---|
| AAL-107 (wako cat# 304-93521) |
10mg | Phos-tag™ /Acrylamide=1/1 (Mn2+-unbound ligand) |
￥66,000 |
| AAL-107M (wako cat# 300-93523) |
2mg | Phos-tag™ /Acrylamide=1/1 (Mn2+-unbound ligand) |
￥27,500 |
| 5mM水溶液 AAL-107S1 (wako cat# 304-93526) |
0.3mL | Phos-tag™ /Acrylamide=1/1 (Mn2+-unbound ligand) |
￥16,500 |
弊社にご注文いただくか、富士フイルム和光純薬株式会社またはその代理店にお問合せください。
Phos-tag™ Mass Ligand
生体内リン酸化化合物検出感度UPのための誘導化剤
質量分析装置を用いた解析において、リン酸化ペプチドのイオン化効率が低く、相対的に量の多い非リン酸化ペプチドによってリン酸化ペプチド由来のイオン強度が抑制されてしまう問題があります。
Phos-tag™ Mass Ligand によって誘導化されたリン酸化ペプチドは安定で高感度なリン酸化ペプチドの質量分析を可能にします。
製品は酢酸塩でのご提供です。系内のリン酸化化合物と速やかに交換します。
Phos-tag™ 誘導化によりLPAを高感度に検出
イメージングMS 解析においても Phos-tag™ 誘導化でリン脂質の局在可視化が可能となりました！
分解酵素KOマウス脳におけるMSイメージング解析
実験データご提供：東京大学大学院薬学系研究科
岩間先生、可野先生、青木淳賢先生
| Phos-tag™ Mass Analytical Kit | Pkg. Size | Information | 希望小売価格（税込） |
|---|---|---|---|
| MS-101KIT (wako cat# 305-93551) |
1set | MS-101L 5mg MS-101H 5mg MS-101N 10mg |
￥110,000 |
MS-101Lは64Zn、MS-101Hは68Zn、MS-101Nは天然型Znを原料とした製品です。
個別製品売り・大容量品の特注承ります。お気軽にお問合せください。
Phos-tag™ Agarose / Phos-tag™ Tip
リン酸化ペプチドの質量分析の前処理に
タンパク質を変性させない条件で操作が可能で、得られたリン酸化タンパク質は質量分析のほか多様な解析法と組み合わせた網羅的リン酸化タンパク質研究に適用できます。
Phos-tag™ Agarose
Phos-tag™ Agarose は Phos-tag™ の特性を活かしたリン酸親和性クロマトグラフィー担体です。
生体内の環境に近いpHでのリン酸化ペプチド/リン酸化タンパク質の分離・濃縮・精製が可能です。
Phos-tag™ Tip
Phos-tag™ Agarose beads マイクロピペットのチップに封入しました。簡単なピペット操作でリン酸化ペプチド／リン酸化タンパク質の濃縮が可能です。
| Phos-tag™ Agarose | Pkg. Size | Information | 希望小売価格（税込） |
|---|---|---|---|
| AG2-501 (wako cat# 389-21201) |
0.5mL | 2〜3 μmol Phos-tag™ /mL-gel | ￥22,000 |
| AG2-503 (wako cat# 385-21203) |
3mL | 2〜3 μmol Phos-tag™ /mL-gel | ￥107,800 |
| Phos-tag™ Tip | Pkg. Size | Information | 希望小売価格（税込） |
|---|---|---|---|
| AG2-103 (wako cat# 387-07321) |
8Tips | 2〜3 μmol Phos-tag™ /mL-gel 20～30nmol Phos-tag™ /Tip |
￥21,450 |
弊社にご注文いただくか、富士フイルム和光純薬株式会社またはその代理店にお問合せください。
Phos-tag™ Biotin
PVDF膜上のリン酸化タンパク質の検出に
Phos-tag™ 分子にビオチンを結合させた製品です。
抗リン酸化抗体を使用せずにPVDF膜上のリン酸化タンパク質を特異的に検出できます。PEGリンカーを有するBTL-111がより高感度です。
BTL-104
BTL-111
Phos-tag™ ビオチンは、アビジンタンパク質と複合体を形成させることで表面プラズモン共鳴分析用やウェスタン解析用のイメージング試薬となります。
特に、ウェスタン解析においては、ブロッティング膜上にブロットされたリン酸化タンパク質を特異的、かつ、高感度に検出できることから多くの研究者にご利用いただいてます。
アレイ化されたペプチド基質のキナーゼアッセイ後のリン酸化検出、抗体アレイと反応したタンパク質のリン酸化解析など、アレイによる網羅的な検出にも利用可能です。
| Phos-tag™ Biotin | Pkg. Size | Information | 希望小売価格（税込） |
|---|---|---|---|
| BTL-111S11mM水溶液 (wako cat# 308-97201) |
0.1mL | Phos-tag™ /Biotin=1/1 (Long Linked) |
￥22,000 |
| BTL-104 (wako cat# 301-93531) |
10mg | Phos-tag™ /Biotin=1/1 | ￥77,000 |
弊社にご注文いただくか、富士フイルム和光純薬株式会社またはその代理店にお問合せください。
Phos-tag™ Gel Stain
ゲル内リン酸化タンパク質を高効率かつ高選択的に検出
生理pHで染色可能なリン酸化蛍光イメージング解析用の試薬です。
pSer、pThr、pTyr、pHis、pAsp残基に選択的に結合します。染色操作はおよそ2時間で完了します。リン酸化タンパク質検出後の全タンパク質染色法も運用可能です。
Phos-tag™ SDS-PAGE や従来の SDS-PAGE と組み合わせて可視化することも可能です。
Phos-tag™ Yellow
nPGS-Y01
EX/Em＝505nm/514nm
Phos-tag™ Magenta
nPGS-M01
EX/Em＝547nm/561nm
Phos-tag™ Cyan
nPGS-C01
EX/Em＝643nm/661nm
Phos-tag™ Aqua
nPGS-A01
EX/Em＝551nm/564nm
専用の平衡化液／染色液／洗浄液用の共通バッファのための試薬（Mixde reagents for Phos-tag™ Common Solution 5x）をご一緒にお買い求めください。
| Phos-tag™ Gel Staining | Pkg. Size | Information | 希望小売価格（税込） |
|---|---|---|---|
| Phos-tag™ Yellow (cat# nPGS-Y01) |
0.2mg | Ex/Em=505nm/514nm 遮光、冷蔵保管 |
￥22,000 |
| Phos-tag™ Magenta (cat# nPGS-M01) |
0.2mg | Ex/Em=547nm/561nm 遮光、冷蔵保管 |
￥22,000 |
| Phos-tag™ Cyan (cat# nPGS-C01) |
0.2mg | Ex/Em=643nm/661nm 遮光、冷蔵保管 |
￥22,000 |
| Phos-tag™ Aqua (cat# nPGS-A01) 親水性を向上させた製品です |
0.2mg | Ex/Em=551nm/564nm 遮光、冷蔵保管 |
￥22,000 |
| Mixed reagents for Phos-tag™ Common Solution 5x (cat# nPGS-MR1) |
500mL溶液用 | 500mL容器入り | ￥5,500 |
弊社にご注文いただくか、富士フイルム和光純薬株式会社、コスモ・バイオ株式会社、またはそれらの代理店にお問合せください。
Phos-tag™ カスタム合成
各種標識、担体への固定、アミノ酸導入などの化学修飾を施した、特別な Phos-tag™ 化合物を合成いたします。
Phos-tag™ カスタム合成品のページをご覧ください。
※ Phos-tag™ 製品のデザイン、仕様、外観、価格につきまして予告なく変更する場合がございますのでご了承ください。
